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                      蛋白表達質粒的一些常識性知識分享

                    1. 發布日期:2021-06-25      瀏覽次數:967
                      •    蛋白表達質粒以PCR擴增為基礎的各類載體構建,如大腸桿菌表達載體、酵母表達載體、桿狀病毒表達載體、哺乳動物表達載體;報告基因載體等。蛋白表達質粒按照復制性質,可把質粒分為兩類:
                          1.嚴緊型質粒
                          當細菌染色體復制一次時,質粒也復制一次,每個細菌內只含1-2個質粒;
                          2.松弛型質粒
                          當細菌染色體復制停止后仍然能繼續復制,每一個細菌內一般含20個左右質??截?。這些質粒的復制是在寄主的松弛控制之下的,每個細菌中含有10-200份拷貝,如果用一定的藥物處理抑制寄主蛋白質的合成還可使質??截悢翟鲋翈浊Х?。
                          質粒的擴增會占用大量資源,當載體用于表達或者其他用途時,也會使用上低拷貝質粒。
                          質粒的接合轉移是細菌遺傳物質轉移的一個重要方式。在質粒轉移過程中,供體菌和受體菌通過結合作用緊密接觸,質粒從供體細胞向受體轉移,同時進行質粒復制。按能否自主轉移,可以將天然存在的質粒分為轉移型質粒和非轉移型質粒兩大類。
                          這里要注意獲得質粒的細菌可隨之而獲得一些生物學特性,如耐藥性或產生細菌素的能力等。從環境友好出發,實驗室里的廢棄菌液,一定要滅過菌才能倒哦。
                          穿梭質粒是指一類人工構建的具有兩種不同復制起點和篩選,因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復制的質粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間,也可推廣到真核生物表達載體的構建,如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動物表達載體pMT2和用于植物細胞的Ti質粒。這些穿梭質粒不僅可以在大腸桿菌中復制擴增,也可以在相應的枯草、酵母、動物或植物細胞中擴增和表達。這樣利于對質粒的分子生物學操作和大量制備。
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